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Análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción
Último revisado: 05.07.2025
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El uso generalizado de diversas endonucleasas de restricción para el análisis del ADN cromosómico ha revelado la enorme variabilidad del genoma humano. Incluso pequeños cambios en las regiones codificantes y reguladoras de genes estructurales pueden provocar el cese de la síntesis de una proteína o la pérdida de su función en el cuerpo humano, lo que suele afectar al fenotipo del paciente. Sin embargo, aproximadamente el 90 % del genoma humano consiste en secuencias no codificantes, que son más variables y contienen numerosas mutaciones neutras o polimorfismos, sin expresión fenotípica. Estas regiones polimórficas (loci) se utilizan en el diagnóstico de enfermedades hereditarias como marcadores genéticos. Los loci polimórficos están presentes en todos los cromosomas y están ligados a una región específica del gen. Al determinar la localización de un locus polimórfico, es posible establecer qué gen está asociado con la mutación que causó la enfermedad en el paciente.
Para aislar regiones polimórficas de ADN, se utilizan enzimas bacterianas, las restrictasas, cuyo producto son los sitios de restricción. Las mutaciones espontáneas que ocurren en los sitios polimórficos los hacen resistentes o, por el contrario, sensibles a la acción de una restrictasa específica.
La variabilidad mutacional en los sitios de restricción puede detectarse modificando la longitud de los fragmentos de restricción del ADN, separándolos mediante electroforesis y posterior hibridación con sondas de ADN específicas. En ausencia de restricción en un sitio polimórfico, se detectará un fragmento grande en los electroforegramas, y en su presencia, un fragmento más pequeño. La presencia o ausencia de un sitio de restricción en loci idénticos de cromosomas homólogos permite un marcaje bastante fiable del gen mutante y normal, y el seguimiento de su transmisión a la descendencia. Por lo tanto, al estudiar el ADN de pacientes en ambos cromosomas con un sitio de restricción presente en una región polimórfica, se detectarán fragmentos cortos de ADN en el electroforegrama. En pacientes homocigotos para una mutación que modifica el sitio de restricción polimórfico, se detectarán fragmentos más largos, y en pacientes heterocigotos, fragmentos cortos y largos.
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