Diagnóstico de herpes

El diagnóstico de herpes se basa en la realización de la diseminación viral clásica en cultivos celulares sensibles, la inmunofluorescencia y los métodos serológicos, la realización de estudios colposcópicos usando métodos de biología molecular moderna (PCR, dot-hibridación), que le permite diagnosticar todas grupo de los herpesvirus, incluyendo HHV-6 y HHV-7 tipos.

Métodos de diagnóstico de laboratorio de infección herpética

Los principales métodos destinados a secretar HSV o detectar partículas virales y / o sus componentes	Métodos auxiliares para detectar anticuerpos contra el VHS en fluidos biológicos del cuerpo humano
Aislamiento de HSV en cultivos sensibles de células y animales Microscopía electrónica directa e inmune Opciones directas e indirectas de MFA IFA Métodos biológicos moleculares Reacción de aglutinación de látex	Reacción de neutralización RSK Determinación de anticuerpos a proteínas no estructurales de HSV-1,2

Se muestra que el 76% de los pacientes tienen herpes genital (GH) causado por HSV-2 y en el 24% - HSV-1 tipo. Y la GG como monoinfección solo ocurrió en el 22% de los pacientes, en el 78% de los casos se detectaron asociaciones microbianas. En el 46% de los pacientes, se detectó parasitocenosis causada por dos patógenos, incluida la clamidia en el 40% de los casos. Con menos frecuencia en los frotis determinados gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

En el 27% de los pacientes, la parasitocenosis estuvo representada por tres, y el 5.2% por cuatro patógenos. Y más a menudo había una combinación de clamidia con los hongos Gardnerella y Candida. Estos datos justifican la necesidad de un examen bacteriológico exhaustivo de los pacientes YY para identificar las combinaciones de agente patógeno, así como un estudio en profundidad de la patogénesis de infecciones mixtas del tracto urogenital, lo que permitiría una terapia compleja diferenciada de la infección por HSV.

Materiales a estudiar en el aislamiento de HSV dependiendo de la localización de las lesiones herpéticas

Localización de lesiones	Contenido de vesículas	Raspado celular				COSUDE	Aspirar de los bronquios	Bioptat	Sangre
		1	2	3	4
Cuero	+								+
Ojos			+						+
Genitales				+					+
Ano	+				+				+
Boca	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Ligero		+					+		+
El hígado								+	+
Herpes congénito	+	+	+				+		+

Métodos de diagnóstico de laboratorio de la infección por citomegalovirus

Métodos	Tiempo requerido para obtener resultados	Notas
VIRUSOLÓGICO
Microscopía electrónica	3 horas	Golpeando
Aislamiento del virus en cultivo celular (CPD)	4-20 días	Estándar, lento
Tinción inmunofluorescente de AH temprana con anticuerpos monoclonales	6 horas	Menos específico
CITOLÓGICO	2-3 horas	Menos específico
Serología
RSK	2 días	Standart
Ssubsistence	1 día	Laborioso
ARRECIFE	6 horas	Simple, específico
NFIF	6 horas	Complicado
RIMF	6 horas	Complicado
IFA (IgM, TO)	6 horas	Rápido, simple
Inmunotransferencia	6 horas	Caro
MOLECULAR-BIOLÓGICO
MG	5-7 días	Costoso, lento
PCR	3 horas	Caro

Métodos para diagnosticar el virus del herpes zóster

Métodos de diagnóstico	Técnicas de laboratorio
INDIRECTO
Asignación	Cultivo de tejidos, embriones de pollo, animales de laboratorio, cocultivo con células permisivas o virus auxiliares
Identificación de aislamientos	Reacción de neutralización, DSC, IF, IPPE, reacción de precipitados aislados, aglutinación, IF
DIRECTO
Citología	Manchas: inmunofluorescencia de color
Histología	Pathomorfología de la célula
Estructura	Microscopía embrionaria, microscopía inmunoelectrónica
Determinación de antígenos	SI, PIÉF, RIM, IFA
Determinación de la producción local de anticuerpos	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Enfoques biológicos moleculares	Hibridación molecular, PCR

Diagnóstico de laboratorio de la infección causada por el virus del herpes zóster

Problemas de diagnóstico	Métodos	Resultados esperados
Infección primaria aguda	1	Detección después de 2 horas
	2	El nivel de anticuerpos crece lentamente
	3	Presente 3 días después de la infección
Infección reactiva aguda	1	Detección de ULV en 2 horas
	2	El nivel de anticuerpos crece lentamente
	4	Presente 4 días después de la aparición de erupciones

1. la determinación en el fluido de vesículas de WIEF;
2. serología: DSC, ELISA, destinado a identificar
3. Serología: ELISA, destinada a detectar IgM;
4. serología: ELISA, destinado a detectar IgA, IgM.

Métodos para indicar la respuesta inmune de una infección causada por el virus del herpes zóster

Enfoque	Método
Detección de un aumento del título de anticuerpos en el segundo suero	RSK, RTGA, RPGA, reacción de neutralización IF, RIM, ELISA
Detección de anticuerpos IgG específicos de clase Ig A en la primera muestra de suero	IFA, IF, RIM, aglutinación de látex

Interpretación de los resultados del examen serológico del suero del paciente sobre las infecciones por herpesvirus (ELISA)

Nombre de la infección / marcador	Umbrales promedio para infecciones
	Resultados del análisis	Interpretación
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positivo 1-6 Positivo 6-10 Positivo> 10 Negativo Positivo 100-300 Negativo <90 Dudoso 90-100	Remisión Agravación de la enfermedad Fase aguda de la enfermedad Sin infección (enfermedad) Fase aguda de la enfermedad Repita el análisis después de 2-3 semanas
Herpes simple 1,2 serotipos Anti-HSV 1/2 total. (100-900%)	Positivo 100-400 Positivo 400-800 Positivo> 800 Negativo <100	Remisión Agravación de la enfermedad Fase aguda de la enfermedad Sin infección (enfermedad)

La tabla muestra los principales métodos de diagnóstico de laboratorio de las infecciones por herpesvirus, así como los materiales biológicos recomendados que se investigan para el aislamiento de HSV, teniendo en cuenta la localización de las lesiones herpéticas.

Es confiable la asignación de herpes simple y CMV a través de la infección de cultivos celulares sensibles. Por lo tanto, en el examen virológico de 26 pacientes en el período de recaída, el VHS se aisló en un cultivo de células Vero sensible en 23 casos (88,4%). En cultivos infectados, se observó un patrón de acción citopática característico del VHS: la formación de células gigantes multinucleadas o la acumulación de células redondeadas y agrandadas en forma de racimos. En el 52.1% de los casos, fue posible detectar focos del efecto citopático del virus a las 16-24 horas después de la infección. Por 48-72 horas de incubación de cultivos infectados, el porcentaje de materiales que causaban destrucción celular específica aumentó al 87%. Y solo en el 13% de los casos, los resultados positivos se detectaron 96 horas después de la infección y más o con pases repetidos.

Métodos de diagnóstico de laboratorio de infección herpética generalizada

Los principales métodos destinados a la detección (aislamiento) de herpesvirus, sus partículas y sus componentes	Métodos auxiliares dirigidos a detectar anticuerpos contra virus del herpes en fluidos biológicos, detectando cambios enzimáticos en el suero sanguíneo
Aislamiento del virus de Herpes en cultivos celulares sensibles y animales microscopía electrónica directa e inmune método de inmunoperoxidasa directa e indirecta realizaciones directos y opciones técnica de anticuerpos fluorescentes indirectos opciones ELISA realizaciones de (DNA-DNA) molecular hibridan Reacción en Cadena de la Polimerasa de aglutinación de látex de Reacción	Neutralización complemento reacción de fijación de reacción de aglutinación de látex indirecta fluorescente método anticuerpo realización indirecta variante método de inmunoperoxidasa realizaciones ELISA Método inmune secante fijación radial del Método complemento Determinación de los niveles de alanina y aspartato

Para diagnosticar la mononucleosis infecciosa (infección causada por VEB), se utilizan métodos serológicos. La reacción de Paul Bunnel con los eritrocitos de un carnero, un título diagnóstico de 1:28 y superior con un solo estudio de suero, o un aumento de 4 veces en anticuerpos en el examen de sueros pareados. Use la reacción de Goff-Bauer con una suspensión de 4% de glóbulos rojos formalizados del caballo. El resultado se toma en cuenta después de 2 minutos, con mononucleosis infecciosa la reacción es altamente específica.

Actualmente, se está desarrollando un inmunoensayo enzimático (ELISA) para diagnosticar la mononucleosis infecciosa. En este caso, los anticuerpos IgG e IgM en el suero del paciente se determinan incubándolo con linfoblastos infectados con EBV, seguido de tratamiento con anticuerpos fluorescentes. En el período agudo de la enfermedad, los anticuerpos contra el antígeno de la cápside viral se determinan en un título de 1: 160 y superior.

Cuando se utiliza un número de sistemas de ensayo comerciales importados en IFA puede identificar: anticuerpos contra anticuerpos del sobre Egan EBV hormigas a antígeno temprano de EBV, el anticuerpo en general a un antígeno temprano del EBV, determinado en la fase aguda de la enfermedad y en el núcleo y en el citoplasma, y el anticuerpo limitado EBV temprano, determinado en la fase aguda de la enfermedad y en el núcleo y en el citoplasma de las células, delimitada anticuerpos para el antígeno temprano del EBV, determinados en medio de la enfermedad sólo en el citoplasma de las células, y los anticuerpos para el antígeno nuclear de EBV. El uso de estos sistemas de prueba permite el diagnóstico diferencial de varias enfermedades asociadas con el EBV.

Después de ELISA positivo para identificar los anticuerpos EBV dan respuesta confirmando inmunoblot, que detectan la presencia de anticuerpos para separar las proteínas marcadoras de EBV (p-proteínas): P23, P54, P72 (la presencia de la proteína sugiere la posibilidad de reproducción EBV), p 138. Said los métodos de laboratorio anteriores se usan para controlar la efectividad del tratamiento.

La sensibilidad de los métodos virológicos es del 85-100%, la especificidad es del 100%, el tiempo de estudio es de 2-5 días. A menudo, en la práctica, se usa el método de inmunofluorescencia directa (PIF) con anticuerpos policlonales o monoclonales contra HSV-1 y HSV-2. El método UIF puede reproducirse fácilmente en un laboratorio clínico convencional, no es costoso, la sensibilidad está por encima del 80% y la especificidad es del 90-95%. La microscopía de inmunofluorescencia reveló la presencia de inclusiones citoplásmicas, características morfológicas, porcentaje de células infectadas en frotis y raspados de la uretra, canal cervical, cuello uterino, recto.

El método UIF da una idea de las propiedades morfológicas de las células y los cambios en la localización de los antígenos de HSV. Además de los signos directos de daño celular por virus del herpes (detección de luminiscencia específica), existen signos indirectos de infección herpética de acuerdo con los datos UIF:

• agregación de materia nuclear, exfoliación de karyoolma;
• presencia de los llamados. "agujeros" de núcleos, cuando solo queda una karyolema del núcleo de la célula;
• la presencia de inclusiones intranucleares - Ternero de Caudry.

Al configurar la UIF, el médico recibe no solo una evaluación cualitativa sino también una cuantitativa del estado de las células infectadas, que usamos para evaluar la efectividad de la terapia antiviral con aciclovir (AC). Por lo tanto, 80 pacientes con herpes genital simple (GG) fueron examinados por el método UIF en dinámica. Se muestra que si, antes del tratamiento con aciclovir en frotis 88% de los pacientes tenía un alto porcentaje de células infectadas (50-75% y superior), después de un curso de aciclovir en los frotis 44% de los pacientes con células sanas detectado en 31% de los casos están marcados células infectadas individuales y El 25% de los pacientes tenían hasta el 10% de las células infectadas.

El contenido de células infectadas en frotis (reacción PIF) de pacientes con herpes genital, tratados con aciclovir

Periodos de enfermedad	Porcentaje en frotis
	Células infectadas					celdas normales
	Más del 75%	50-75%	40-50%	10%	Células individuales en n / sp
Recaída (antes del tratamiento)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisión (después del tratamiento)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Usando muchos años de UIF y el método de hibridación de punto, casi el 100% de los casos coincidieron con los resultados del estudio. Debe tenerse en cuenta que con el fin de aumentar la fiabilidad del diagnóstico de GH, sobre todo en los casos en que es subclínica y formas malomanifestnyh de herpes, se recomienda utilizar el método de diagnóstico de laboratorio 2-3, especialmente cuando se examinan las mujeres embarazadas, las mujeres con antecedentes obstétricos desfavorecidos, las personas con diagnóstico ginecológico no especificado.

Entonces, cuando se realiza el diagnóstico por PCR de las infecciones virales bacterianas del tracto urogenital, es necesario evaluar los resultados positivos obtenidos teniendo en cuenta la anamnesis, la presencia (o ausencia) de síntomas clínicos específicos de la enfermedad. Si se detecta clamidia con PCR, entonces en este caso es posible hablar de infección y resolver los problemas de la terapia en consecuencia. En caso de detección de micoplasmas (ureaplasmas) son patógenos oportunistas, para confirmar se requiere el diagnóstico para llevar a cabo estudios adicionales de cultivo, t material. Crop E. De una sensible paciente a cultivos de células. Solo cuando se obtienen resultados positivos en el análisis de cultivos, podemos hablar de la confirmación de laboratorio del diagnóstico de micoplasmosis. El mismo método permitirá, si es necesario, determinar la sensibilidad de los micoplasmas aislados a formas medicinales frecuentemente usadas (antibióticos, fluoroquinolonas, etc.).

Quizás una infección de una etapa con varios virus de la familia Nepresviridae. A menudo detectamos la infección de un paciente con virus HSV-1, HSV-2 y CMV. Mucho más a menudo infectados con varios virus de herpes fueron pacientes con manifestaciones clínicas y de laboratorio de IDS secundaria (pacientes con oncohematología, oncológicos, infectados con VIH). Por lo tanto, se muestra que los trastornos clínicos e inmunológicos que progresan con la infección por VIH van acompañados de un aumento en el número de herpesvirus detectados por hibridación molecular. En este pronóstico, el más significativo puede considerarse una detección compleja en una etapa del ADN de tipo HSV-1, CMV y HHV-6.

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