Inmunofenotipado de las hemoblastosis

El progreso significativo en la investigación hematológica en los últimos años está asociado con el uso de métodos inmunológicos modernos y medios automatizados de análisis y clasificación de células de sangre periférica y médula ósea: citómetros de flujo. Los estudios morfológicos y citoquímicos tradicionales de células sustrato de la enfermedad (sangre, médula ósea roja, ganglios linfáticos, bazo, etc.) en muchos casos, especialmente en enfermedades linfoproliferativas, no nos permiten identificar la variedad completa de variantes entre formas morfológicamente similares y establecer el origen del clon patológico. Estos problemas pueden resolverse solo mediante el estudio de las características inmunológicas de las células. Cada etapa de diferenciación de las células hematopoyéticas corresponde a su propio conjunto de antígenos, que según la clasificación internacional se denominan diferenciación y se dividen en grupos de diferenciación, designados CD.

En los cambios neoplásicos, un bloqueo de la diferenciación puede ocurrir en cualquier etapa del desarrollo celular normal, lo que resulta en la formación de un clon de células patológicas que determinan el sustrato patológico y comparten las mismas características inmunológicas (o fenotípicas). Mediante el estudio de estos marcadores en las células, es posible determinar a qué forma y variante de la enfermedad corresponden; es decir, con base en el fenotipo inmunológico de las células, se puede realizar el diagnóstico diferencial, lo cual es más difícil en las enfermedades linfoproliferativas, ya que las células principales del sustrato patológico de la enfermedad son células morfológicamente casi idénticas.

La fenotipificación permite el uso de anticuerpos monoclonales para tipificar células sanguíneas blásticas y maduras de las series mielo, mono y linfocítica mediante la presencia de antígenos de diferenciación (receptores) en la pared celular. La sección "Evaluación del estado inmunitario" describe parcialmente las características y el valor diagnóstico del estudio de marcadores celulares. A continuación, se presenta una breve descripción de los marcadores antigénicos celulares en relación con el diagnóstico de hemoblastosis. Los siguientes antígenos (marcadores) pueden detectarse en las membranas de las células sanguíneas y la médula ósea roja.

• El CD2 es una glucoproteína transmembrana monomérica. Está presente en la superficie de todos los linfocitos T circulantes en la sangre y en algunos linfocitos NK. El CD2 participa en el proceso de activación alternativa de los linfocitos T. La detección de CD2 mediante anticuerpos monoclonales en la práctica clínica se utiliza para la fenotipificación de la leucemia aguda de células T, los linfomas y las enfermedades inflamatorias crónicas y de inmunodeficiencia.
• El CD3 es un complejo proteico asociado al receptor de células T específico para antígenos y es el principal marcador funcional de los linfocitos T. Facilita la transferencia de la señal de activación desde la membrana hasta el citoplasma celular. La determinación de CD3 está indicada para el diagnóstico de leucemia aguda de células T, linfomas (el CD3 no se expresa en neoplasias linfoides no T) y enfermedades de inmunodeficiencia.
• El CD4 es una glucoproteína transmembrana expresada por una subpoblación de linfocitos T cooperadores (inductores), que constituyen el 45% de los linfocitos de sangre periférica. En las primeras etapas del desarrollo linfocitario en el timo, todos los linfocitos corticales expresan antígenos CD4, así como CD8. Los timocitos medulares, cuyo fenotipo es similar al de los linfocitos T CD4+ maduros de sangre periférica (linfocitos T cooperadores), ya expresan receptores CD4 o CD8. En sangre periférica, hasta el 5% de las células son portadoras de marcadores CD4 y CD8. Es posible una expresión menor de CD4 en algunas células de la serie monocítica. El CD4 se expresa en la mayoría de los linfomas de linfocitos T, incluida la micosis fungoide, así como en la leucemia de linfocitos T asociada al HTLV (HTLV, virus linfotrópico T humano).
• El CD5 es una glucoproteína monocatenaria presente en todos los linfocitos T maduros y en la mayoría de los timocitos, y se expresa débilmente en los linfocitos B. El CD5 se detecta en células neoplásicas de la leucemia linfocítica crónica de células B y el linfoma centrocítico. En otros tipos de enfermedades linfoides malignas (linfoma folicular, leucemia de células pilosas y linfoma de células grandes), el CD5 no se expresa.
• El CD7 es una proteína monocatenaria, el marcador más temprano de la diferenciación de las células T. Se expresa en los prolinfocitos T incluso antes de su migración al timo. Se detecta en la mayoría de las células NK, con una expresión débil en los monocitos. Los linfocitos B y los granulocitos no contienen este antígeno. La determinación del CD7 se utiliza para diagnosticar linfomas y leucemia linfoblástica de células T infantil.
• El CD8 es una proteína compuesta por dos cadenas polipeptídicas unidas por puentes disulfuro. Se expresa en una subpoblación de linfocitos T citotóxicos y supresores, que constituyen entre el 20 % y el 35 % de los linfocitos de sangre periférica. Este antígeno también se expresa en los linfocitos NK, los timocitos corticales, el 30 % de los timocitos medulares y una subpoblación de glóbulos rojos. El CD8 se estudia para cuantificar el contenido de linfocitos T supresores (véase la sección «Linfocitos T supresores en sangre» más arriba).

• El CD10 es una endopeptidasa asociada a la membrana celular. Se expresa en formas jóvenes de linfocitos B y en una subpoblación de linfocitos corticales. El CD10 se expresa en todas las células de leucemia linfoblástica aguda (LLA).
• El CD11c se expresa en la membrana celular de los macrófagos, monocitos, granulocitos, células NK y células de leucemia de células pilosas.
• La CD13 es una glicoproteína expresada por células de linaje mielomonocítico (células progenitoras, neutrófilos, basófilos, eosinófilos, monocitos y células de leucemia mieloide). Está ausente en los linfocitos T y B, los eritrocitos y las plaquetas.
• El CD14 es una glucoproteína de superficie de membrana. Se expresa principalmente en monocitos y macrófagos. Se detecta en más del 95 % de los monocitos de sangre periférica y médula ósea. Se observa una fuerte expresión de CD14 en la leucemia mieloblástica aguda. Este antígeno no se expresa en la leucemia linfoblástica aguda ni crónica.
• El CD15 es un oligosacárido que participa en la fagocitosis y la quimiotaxis. Este antígeno está presente en la superficie de los granulocitos maduros y las células de Berezovsky-Sternberg. La expresión del antígeno CD15 se detecta en la enfermedad de Hodgkin. En los linfomas no Hodgkin, el CD15 no se detecta en la mayoría de los casos.
• El CD16 se expresa en la superficie de granulocitos, monocitos, macrófagos y células NK. Todos los linfocitos que expresan este antígeno presentan citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. El CD16 se determina durante la tipificación de leucemias mielocíticas crónicas para caracterizar las células NK.
• El CD19 es una glicoproteína presente en todos los linfocitos B periféricos y en todos los precursores de células B. Está ausente en las células plasmáticas. Es el marcador más temprano de las células B y desempeña un papel importante en la regulación de su activación y proliferación. El CD19 se expresa en todas las células neoplásicas de la leucemia aguda de origen B y también está presente en algunas formas de leucemia monoblástica aguda.
• El CD20 es una proteína no glicosilada. En la ontogénesis de los linfocitos B, el antígeno CD20 aparece después del CD19 en la etapa de diferenciación precelular de los linfocitos B. Está ausente en la membrana plasmática de las células plasmáticas. Se expresa en la leucemia linfoblástica aguda (LLA), la leucemia linfocítica crónica de células B, la leucemia de células pilosas (TLP), el linfoma de Burkitt y, muy raramente, en la leucemia monoblástica aguda.
• CD21 es una glicoproteína presente en cantidades significativas en los linfocitos B de los órganos linfoides y en pequeñas cantidades en las células B de la sangre periférica. CD21 es un receptor del virus de Epstein-Barr.
• CD22 es una proteína compuesta por dos cadenas polipeptídicas. Se expresa en la membrana de la mayoría de los linfocitos B, incluyendo las células precursoras (prolinfocitos). El antígeno no se expresa en los linfocitos B (células plasmáticas) tras su activación. La expresión más pronunciada de CD22 se detecta en las células de la leucemia de células pilosas, y una expresión débil en la leucemia mieloide y la leucemia linfoblástica aguda (LLA) de células no T.
• El CD23 es una glicoproteína expresada en mucha mayor medida por los linfocitos B de sangre periférica activados. El CD23 media la citotoxicidad dependiente de IgE y la fagocitosis por parte de los macrófagos y los eosinófilos.
• El CD25 es una glucoproteína monocatenaria identificada como un receptor de baja afinidad para la IL-2. Este receptor se expresa en los linfocitos T activados y, en menor medida, en los linfocitos B activados. En la sangre periférica de individuos sanos, el antígeno está presente en más del 5 % de las células linfoides.
• El CD29 es un receptor de fibronectina. Está ampliamente distribuido en los tejidos y es expresado por los leucocitos. La detección del CD29 en células de sangre periférica permite tipificar una subpoblación de linfocitos T con fenotipo CD4+CD29+, denominados cooperadores de tipo 2 (Th2). Estas células participan en la respuesta inmunitaria humoral mediante la producción de linfocinas.
• El CD33 es una glucoproteína transmembrana. Está presente en la superficie de las células de las series mieloide y monocítica. Se encuentra en la superficie de los monocitos y, en menor medida, de los granulocitos en sangre periférica. Aproximadamente el 30% de las células de la médula ósea roja expresan CD33, incluyendo mieloblastos, promielocitos y mielocitos. Este antígeno está ausente en las membranas de las células madre pluripotentes. La determinación de CD33 se utiliza para caracterizar las células en leucemias de origen mieloide. Las células leucémicas de origen linfoide y eritroide no expresan CD33.
• El CD34 es una fosfoglicoproteína expresada por las células progenitoras hematopoyéticas, incluyendo las células madre monopotentes. La expresión más pronunciada de Ag se observa en las células progenitoras tempranas; a medida que las células maduran, la expresión del marcador disminuye. El CD34 también se encuentra en las células endoteliales. La determinación de CD34 se utiliza para caracterizar las células en leucemias mieloblásticas y linfoblásticas agudas. En las leucemias linfocíticas crónicas y los linfomas, no se detecta la expresión del antígeno CD34.

• El CD41a se expresa en plaquetas y megacariocitos. Los anticuerpos monoclonales para detectar el CD41a se utilizan para diagnosticar la leucemia megacarioblástica. En la trombastenia de Glanzmann, la expresión de este antígeno está ausente o significativamente suprimida.
• El CD42b es una glucoproteína de membrana compuesta por dos cadenas polipeptídicas. Este marcador se detecta en la superficie de plaquetas y megacariocitos. En la práctica clínica, la detección del CD42b se utiliza para diagnosticar la trombocitopatía (síndrome de Bernard-Soulier).
• El CD45RA pertenece a la clase de las glicoproteínas transmembrana. Es un antígeno leucocitario común. Se expresa en la membrana celular de los linfocitos B, en menor medida en los linfocitos T y en los timocitos medulares maduros. Este marcador no se expresa en los granulocitos.
• El CD45RO es una isoforma de bajo peso molecular del CD45RA, un antígeno leucocitario común. Se detecta en linfocitos T (linfocitos T de memoria), una subpoblación de linfocitos B, monocitos y macrófagos. Los anticuerpos monoclonales contra el CD45RO interactúan con la mayoría de los timocitos, una subpoblación de linfocitos T CD4+ y CD8+ en reposo, y linfocitos T maduros activados. Las células de origen mielomonocítico, los granulocitos y los monocitos también son portadores de este antígeno. Se detecta en linfomas centroblásticos e inmunoblásticos.
• El CD46 es un dímero O-glicosilado. Se encuentra ampliamente distribuido en los tejidos y se expresa en linfocitos T y B, monocitos, granulocitos, células NK, plaquetas, células endoteliales y fibroblastos, pero está ausente en la superficie de los eritrocitos. El CD46 proporciona protección tisular frente al complemento.
• El CD61 es un antígeno plaquetario. Se expresa en plaquetas de sangre periférica y médula ósea roja, así como en megacariocitos y megacarioblastos. Su determinación se utiliza como marcador en la leucemia megacarioblástica aguda. La expresión del antígeno está ausente o suprimida en pacientes con trombastenia de Glanzmann.
• El CD95, también llamado Fas o APO-1, es una glucoproteína transmembrana perteneciente a la familia de receptores del factor de necrosis tumoral. Se expresa en cantidades significativas en los linfocitos T (CD4+ y CD8+) de sangre periférica y, en menor medida, en los linfocitos B y las células NK. Este antígeno también se expresa en granulocitos, monocitos, células tisulares y células neoplásicas. La unión del CD95 al ligando Fas (CD95L) induce la apoptosis celular.
• El CD95L, o ligando Fas, es una proteína de membrana perteneciente a la familia de receptores del factor de necrosis tumoral. Este antígeno es expresado por linfocitos T citotóxicos, células NK y, con mucha frecuencia, células tumorales; es el principal inductor de apoptosis celular.
• El HLA-DR es un determinante monomórfico de las moléculas de clase II del complejo mayor de histocompatibilidad (HLA) humano. Este marcador se expresa en células de Langerhans, células dendríticas de órganos linfoides, ciertos tipos de macrófagos, linfocitos B, linfocitos T activados y células epiteliales tímicas. El estudio de este marcador se utiliza para la determinación cuantitativa de linfocitos T activados con el fenotipo CD3+ HLA-DR+.

Utilizando una selección diferente de anticuerpos monoclonales contra marcadores, es posible crear un retrato fenotípico de células característico de una forma determinada de leucemia.

Además del uso de métodos de inmunofenotipificación para el diagnóstico y diagnóstico diferencial de las hemoblastosis, su uso en el tratamiento para evaluar el estado de remisión y la población residual de células leucémicas ha demostrado ser especialmente importante. Conocer el perfil fenotípico de las células blásticas durante el diagnóstico permite detectar células del clon leucémico durante la remisión y, mediante el aumento de su número, predecir el desarrollo de una recaída mucho antes (1-4 meses) de la aparición de sus signos clínicos y morfológicos.

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