Microscopía confocal

La microscopía confocal se considera actualmente uno de los métodos más prometedores para la obtención de imágenes de la piel in vivo, por lo que el interés en ella es inusualmente alto tanto entre los médicos como entre los representantes de los institutos de investigación.

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Capacidades de la microscopía confocal

En dermatología, la microscopía láser confocal se utiliza para:

• estudio de la penetración de compuestos en la piel (vías de penetración, cinética, distribución en la piel);
• observación del funcionamiento de las glándulas (determinación del estado activo y pasivo);
• estudios del lecho microcirculatorio (incluso en tiempo real);
• diagnóstico de neoplasias.

Sin discutir las ventajas y desventajas de los tipos de microscopía confocal mencionados anteriormente, observamos que en los últimos años, la microscopía confocal láser de fluorescencia se ha vuelto cada vez más popular.

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Microscopía confocal para el examen de la piel

El microscopio confocal ofrece dos oportunidades invaluables: el estudio de tejidos a nivel celular en estado de actividad vital fisiológica y la demostración de los resultados del estudio (es decir, la actividad celular) en cuatro dimensiones: altura, anchura, profundidad y tiempo. Para la calidad de la imagen y la profundidad del estudio, la capacidad del tejido para transmitir la luz, es decir, su transparencia, es fundamental. El método de microscopía confocal es sin contacto, por lo que el haz de luz no causa daño ni molestias al paciente examinado ni al animal de experimentación.

La microscopía láser de barrido confocal (CSLM) se utiliza para examinar la piel. Este método permite visualizar la epidermis y la capa papilar de la dermis con una resolución cercana a la histológica. Todos los resultados del examen se muestran en el monitor y se guardan como un conjunto de archivos de imagen (como microfilm (en formato dinámico) o microfotografías).

Hay dos tipos de método:

• reflexiva (reflectancia CSLM): se basa en el hecho de que diversas estructuras intracelulares e intercelulares tienen diferentes índices de refracción de la luz, lo que permite obtener una imagen de contraste.
• fluorescencia (fluorescencia CSLM): utiliza luz láser que penetra la piel y excita los exo o endocromóforos en ella, los cuales en respuesta comienzan a emitir fotones (es decir, emiten fluorescencia).

La resolución lateral es la distancia mínima entre puntos ubicados en un plano horizontal, es decir, un plano paralelo a la superficie de la piel. La resolución axial es la distancia mínima entre puntos ubicados en un plano perpendicular a la superficie de la piel.

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Historia de la microscopía confocal

La idea de crear un microscopio capaz de mostrar una sección de tejido vivo a nivel celular se desarrolló activamente hace 130 años. El elemento principal de los microscopios modernos, diseñado a finales del siglo XIX, era un disco giratorio con diminutos orificios dispuestos en espiral. Este disco fue inventado en 1883 por el estudiante alemán Paul Nipkow, de quien recibió su nombre: el disco de Nipkow. La invención se basó en la capacidad de la luz, al pasar a través de diminutos orificios en el disco y una lente de aumento, para penetrar profundamente en el tejido e iluminar un fragmento celular a cierta distancia de la superficie. Cuando el disco gira rápidamente, los fragmentos forman una sola imagen. Al alejar o acercar la estructura del objeto, es posible variar la profundidad de la sección óptica del tejido en estudio.

Fue recién con la llegada de las grabadoras de vídeo en la década de 1980 y de las computadoras capaces de procesar imágenes a principios de la década de 1990 que se hizo posible crear y utilizar eficazmente los microscopios modernos que se emplean hoy en día.