Vitamina A en la sangre

Valores de referencia (norma) para la concentración de vitamina A (retinol) en el suero sanguíneo: en niños de 1 a 6 años - 0,7-1,5 μmol/l, de 7 a 12 años - 0,91-1,71 μmol/l, de 13 a 19 años - 0,91-2,51 μmol/l; en adultos - 1,05-2,09 μmol/l.

La vitamina A es una vitamina liposoluble y existe en dos formas: la propia vitamina A, o retinol (presente únicamente en productos animales), y la provitamina A, conocida como caroteno (obtenida de productos animales y vegetales), que puede convertirse en retinol en las paredes del tracto digestivo. Aproximadamente entre el 50 % y el 90 % del retinol de la dieta se absorbe en el intestino delgado y se transporta en un complejo unido a quilomicrones hasta el hígado, donde se almacena como palmitato de retinol. Cuando es necesario, se libera al torrente sanguíneo en forma de retinol en complejo con la proteína transportadora de vitamina A. En el suero sanguíneo, el complejo de proteína transportadora de vitamina A + retinol se une a la transtiretina. Desde el suero sanguíneo, el retinol es captado por células diana, como los fotorreceptores de la retina y el epitelio.

Cuando el cuerpo recibe vitamina A en cantidades que superan las necesidades (180-430 mcg de retinol al día, según la edad, el sexo y el estado fisiológico), el exceso se deposita en el hígado, formando un depósito de esta vitamina. Al reducirse la ingesta de retinol con los alimentos, las reservas hepáticas se liberan al torrente sanguíneo, manteniendo la concentración sérica de retinol en un nivel normal (por encima de 0,7 μmol/l). Otras formas biológicamente activas de vitamina A (retinal y ácido retinoico) están presentes en la sangre en concentraciones muy bajas (por debajo de 0,35 μmol/l); los ésteres de retinol representan aproximadamente el 5 % de la vitamina A total (0,1-0,17 μmol/l).

La vitamina A desempeña un papel importante en los procesos de oxidación-reducción. El retinol promueve la formación de glucógeno en el hígado y los músculos, ayuda a aumentar el colesterol en sangre y participa en la síntesis de hormonas esteroides y sexuales. Es necesario para el crecimiento y la formación del sistema óseo, la resíntesis de rodopsina y también promueve el funcionamiento normal de las membranas mucosas y el epitelio tegumentario de la piel, previniendo su metaplasia, hiperqueratosis y descamación excesiva. La vitamina A ayuda a fortalecer el cabello, los dientes y las encías. En los últimos años, se ha demostrado el papel de la vitamina A en la prevención del cáncer y la regulación inmunitaria (es necesaria para completar la fagocitosis, aumenta la síntesis de Ig, estimula la formación de linfocitos T-killers, estimula los linfocitos T-helpers tipo II, etc.). La vitamina A es un antioxidante activo que actúa principalmente en presencia de vitamina E; protege a la vitamina C de la oxidación. La deficiencia de vitamina A se considera un factor de riesgo para las neoplasias malignas. Estudios experimentales han demostrado que aumentar el contenido de vitamina A en la dieta aumenta la esperanza de vida media en un 17,5 %. El zinc es un cofactor esencial en el metabolismo de la vitamina A (necesario para la síntesis de la proteína transportadora de vitamina A).

El requerimiento diario promedio de retinol para adultos (20-50 años) es de 1.2 mg (4000 UI, 1 UI equivale a 0.3 mcg de retinol), para mujeres embarazadas - 1.5 mg (5000 UI), para mujeres en período de lactancia - 1.8 mg (6000 UI), para personas mayores de 60 años - 2.5 mg (10,000 UI). Al menos un tercio del requerimiento diario de retinol debe suministrarse al cuerpo en forma terminada; el resto puede cubrirse consumiendo carotenoides, a partir de los cuales se forma el retinol en el cuerpo. Debe tenerse en cuenta que aproximadamente el 30% del retinol en los productos alimenticios se destruye durante el tratamiento térmico. La actividad del retinol es dos veces mayor que la del caroteno, además, solo el 30-40% de este último se absorbe en el intestino. Por lo tanto, al evaluar la dieta, se cree que 1 mg de retinol equivale aproximadamente a 6 mg de carotenoides.

Determinación de retinol (vitamina A) y carotenoides en suero sanguíneo según Bessey modificado por LA Anisimova

Principio del método

La determinación de vitamina A y carotenoides se basa en su hidrólisis en una solución alcohólica alcalina seguida de extracción con una mezcla de disolventes orgánicos.

Reactivos

• Solución de hidróxido de potasio (KOH) 11 M.
• Alcohol etílico al 96%.
• Solución de hidróxido de potasio (KOH) 1 M en alcohol etílico al 96 %: se mezcla 1 volumen de solución de KOH 11 M con 10 volúmenes de alcohol etílico al 96 %. El reactivo se prepara el mismo día del estudio. Si se observa coloración durante la mezcla, el alcohol debe purificarse por destilación antes de su uso.
• Xileno, químicamente puro
• Octano, químicamente puro
• Mezcla de xileno y octano: se prepara mezclando volúmenes iguales de xileno y octano.

Los estudios se realizan utilizando un espectrofotómetro.

El proceso de determinación de la vitamina A

Se coloca sangre extraída del dedo (aproximadamente 1 ml) en un tubo de centrífuga y se coloca en un vaso de vidrio con agua tibia (temperatura de 40-45 °C) durante 20-30 minutos. Para separar el suero, se dibuja cuidadosamente el coágulo de sangre alrededor del borde de las paredes del tubo con una varilla de vidrio delgada y se centrifuga a 3000 rpm durante 10 minutos.

Se recogen 0,12 ml de suero y se transfieren a un tubo de aglutinación, donde se añaden 0,12 ml de solución alcohólica de hidróxido de potasio 1 M. El contenido se agita vigorosamente.

Los tubos de ensayo con muestras se colocan en un baño de agua durante 20 minutos a una temperatura de 60° C para realizar la hidrólisis.

Las muestras se enfrían, se les añaden 0,12 ml de mezcla de xileno-octano y se agitan vigorosamente durante 10-15 s. Se enfrían de nuevo y se centrifugan.

La capa superior que contiene vitamina A y carotenoides se retira cuidadosamente utilizando una pipeta Pasteur con pera de goma y se transfiere a microcubetas.

Las muestras se espectrofotómetros a una longitud de onda de 328 nm para determinar la vitamina A y a una longitud de onda de 460 nm para determinar los carotenoides.

Después de la espectrofotometría, las muestras se exponen a radiación ultravioleta para destruir la vitamina A. Para este propósito, se instala una lámpara de cuarzo (bactericida) a una distancia de 15-20 cm de las microcubetas para que la parte de la cubeta llena de líquido esté expuesta a la radiación; el tiempo de irradiación es de 45-60 min.

Las muestras se vuelven a espectrofotometrizar a una longitud de onda de 328 nm. El contenido de vitamina A se determina mediante la diferencia en los valores de extinción (densidad óptica), considerando el coeficiente (factor) 637 calculado por Bessey para la vitamina A.

El cálculo se realiza según la fórmula:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Donde X es el contenido de vitamina A, μg/dl; 637 es el coeficiente calculado por Bessey para determinar la vitamina A; E328(1) es la densidad óptica de la solución antes de la irradiación; E328(2) es la densidad óptica de la solución después de la irradiación.

El coeficiente para convertir la concentración de vitamina A de µg/dL a µmol/L es 0,035.

El contenido de carotenoides se calcula mediante la fórmula:

X = 480-E480,

Donde X es el contenido de carotenoides, μg/dl; 480 es el coeficiente calculado por Bessey para determinar carotenoides; E480 es la densidad óptica de la solución de prueba.

Nota

Según Bessey, al realizar una investigación se puede utilizar un volumen mayor o menor de suero, pero su relación con el volumen de la solución de alcohol debe ser constante con cualquier cambio en el volumen (cantidad) de la mezcla de xileno y octano.

El contenido normal de vitamina A en el suero sanguíneo es de 160-270 μg/l en recién nacidos y lactantes; de 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l) en adultos. El contenido de carotenoides en el suero sanguíneo de adultos es de 800-2300 μg/l.