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PCR como método de diagnóstico de enfermedades genéticas
Último revisado: 23.04.2024
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La PCR es un nuevo logro en genética molecular, utilizado para la amplificación de ADN y permite que la porción específica de ADN (es decir, cualquier gen de interés) se replique rápidamente in vitro más de 200,000 veces. Para llevar a cabo la reacción, es suficiente tener el material de ADN de una célula; la cantidad de ADN amplificado por PCR es tan grande que este ADN puede teñirse simplemente (utilizando sondas radiactivas después de que no se requiera electroforesis). Un requisito previo para llevar a cabo la PCR es el conocimiento de la secuencia de nucleótidos de la región de ADN amplificada para la selección adecuada de cebadores sintetizados artificialmente.
Actualmente, la PCR es un proceso que ocurre en un solo tubo y que consiste en ciclos repetitivos de amplificación (reproducción, copia) de secuencias de ADN específicas con el fin de obtener un número suficientemente grande de copias que se pueden identificar mediante electroforesis. Uno de los componentes clave de la reacción es "cebadores": oligonucleótidos sintéticos que consisten en 20-30 bases, complementarias a "sitios" (secciones) de hibridación (fijación) en el sitio identificado del ADN molde.
La PCR procede automáticamente en un termostato programable - termociclador (termociclador). El ciclo de tres pasos, que da como resultado réplicas de la parte identificable del ADN molde, se repite de 30 a 50 veces de acuerdo con el programa preestablecido del termociclador. En el primer ciclo, los oligoprameros se hibridan con el ADN molde original, y luego (en ciclos posteriores) y con las moléculas de ADN recién sintetizadas a medida que se acumulan en la mezcla de reacción. En el último caso, la síntesis de ADN no termina debido a cambios de temperatura, y al llegar a la zona fronteriza de ADN polimerasa amplificado, que determina el tamaño de la región de ADN recién sintetizado dentro de un nucleótido.
Como método para detectar las moléculas de ADN obtenidas, se usa electroforesis, por medio de la cual el material amplificado se divide de acuerdo con el tamaño de los amplicones (productos de amplificación).
Con la ayuda de PCR, es posible investigar directamente los sitios de localización de mutaciones putativas o sitios polimórficos, y también estudiar la presencia de otras características específicas del ADN.
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