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La PCR como método de diagnóstico de enfermedades genéticas
Último revisado: 04.07.2025
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La PCR es un nuevo logro de la genética molecular, utilizada para la amplificación de ADN, que permite la multiplicación rápida in vitro de una región específica de ADN (es decir, cualquier gen de interés) más de 200.000 veces. Para llevar a cabo la reacción, basta con ADN de una célula; la cantidad de ADN amplificado por PCR es tan grande que este ADN puede teñirse fácilmente (no se requieren sondas radiactivas tras la electroforesis). Un requisito previo para la PCR es conocer la secuencia de nucleótidos de la región de ADN amplificada para la correcta selección de los cebadores sintetizados artificialmente.
Actualmente, la PCR es un proceso de un solo tubo que consiste en ciclos repetidos de amplificación (reproducción, copia) de una secuencia específica de ADN para obtener un número suficiente de copias que puedan identificarse mediante electroforesis. Uno de los componentes clave de la reacción son los cebadores, oligonucleótidos sintéticos que constan de 20 a 30 bases complementarias a los sitios (áreas) de hibridación (unión) en la zona identificada del ADN matriz.
La PCR se realiza automáticamente en un termostato programable, un termociclador (amplificador). El ciclo de tres etapas, que genera copias exactas de la sección identificada del ADN de la matriz, se repite de 30 a 50 veces según el programa especificado del termociclador. En el primer ciclo, los oligocebadores hibridan con el ADN de la matriz original y, posteriormente (en ciclos posteriores), con las moléculas de ADN recién sintetizadas a medida que se acumulan en la mezcla de reacción. En este último caso, la síntesis de ADN finaliza no por un cambio de temperatura, sino al alcanzar el límite de la ADN polimerasa de la sección amplificada, lo que determina el tamaño de la sección de ADN recién sintetizada con una precisión de un nucleótido.
La electroforesis se utiliza como método para detectar las moléculas de ADN obtenidas, con cuya ayuda se separa el material amplificado según el tamaño de los amplicones (productos de amplificación).
La PCR se puede utilizar para examinar directamente las ubicaciones de mutaciones sospechosas o sitios polimórficos, así como para estudiar la presencia de cualquier otra característica específica del ADN.
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