Virus de la hepatitis A

La hepatitis viral A es una enfermedad infecciosa humana caracterizada por un daño hepático predominante y se manifiesta clínicamente por intoxicación e ictericia. El virus de la Hepatitis A fue detectado en 1973 por S. Feinstone (y otros) usando el método de microscopía electrónica inmune e infectando monos: chimpancés y titís. La esencia del método de microscopía electrónica inmune es que los anticuerpos específicos (suero de convalecientes) se agregan al filtrado de las heces del paciente con hepatitis A y el precipitado se somete a un microscopio electrónico. Debido a la interacción de virus con anticuerpos específicos, se someten a agregación específica. En este caso, son más fáciles de detectar y la agregación bajo la influencia de anticuerpos confirma la especificidad del patógeno. El descubrimiento de S. Feinstone fue confirmado en experimentos con voluntarios.

El virus de la hepatitis A tiene una forma esférica, el diámetro del virión es de 27 nm. El genoma está representado por un ARN positivo monocatenario con una masa de 2,6 MD. Supercapsid está ausente. El tipo de simetría es cúbico: icosaedro. La cápside tiene 32 capsómeros, está formada por cuatro polipéptidos (VP1-VP4). Por sus propiedades, el virus de la hepatitis A pertenece al género Heparnovirus, la familia Picornaviridae. Antigénicamente, el virus de la hepatitis A (VHA - virus de la hepatitis A) es homogéneo. HAV se multiplica bien en el cuerpo de chimpancés, mandriles, hamadryls y monos de juego (titís). Durante mucho tiempo, el virus no pudo cultivarse. Solo en la década de 1980. Fue posible obtener cultivos celulares en los que se propaga HAV. Inicialmente, para estos fines, se usaron líneas de riñón trasplantado del riñón de mono rhesus (cultivo FRhK-4), y ahora - la línea trasplantada de células renales de monos verdes (cultivo 4647).

De acuerdo con las recomendaciones de los expertos de la OMS, se adoptó la siguiente nomenclatura de marcadores del virus de la hepatitis A: anticuerpos contra el virus de la hepatitis A del virus de la hepatitis A: anticuerpos IgM anti-NAV y anti-NAV.

El VHA es partículas pequeñas con un diámetro de 27-30 nm, que tiene simetría icosahédrica y posee homogeneidad. En el patrón de difracción de electrones obtenido por el método de agregación inmune, se detectan partículas electrón-densas con capsómeros dispuestos simétricamente dispuestos superficialmente. Con contraste negativo, se detectan partículas completas y vacías en las preparaciones. Nucleocapsid NAV, a diferencia de la gripe, no tiene protuberancias superficiales y membranas. También es importante que el virión HAV no tenga una estructura en forma de corazón.

De acuerdo a sus propiedades físico-químicas de los virus de hepatitis A se relaciona con la familia de Picornaviridae, género Enterovirus con número atómico 72. Sin embargo, esta taxonomía era demasiado inusual, y la OMS encontró posible dejar la terminología "hepatitis A virus".

Al igual que todos los virus de la familia Picornaviridae, el virus de la hepatitis A contiene ácido ribonucleico. Algunos laboratorios han demostrado la posibilidad de clonar el genoma del virus de la hepatitis A, lo que abre la posibilidad de obtener preparaciones de vacunas.

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Resistencia del virus de la hepatitis A

El virus es relativamente resistente a altas temperaturas, ácidos, disolventes de grasas (no contiene lípidos), desinfectantes, tolera bien a baja temperatura. Todo esto contribuye a su preservación a largo plazo en el entorno externo. A temperatura ambiente, sobrevive durante varias semanas, a 60 ° C pierde parcialmente la infectividad después de 4-12 horas, completamente - después de unos minutos a 85 ° C. Altamente resistente al cloro, por lo que es capaz de penetrar en el agua del grifo a través de las barreras de las plantas de tratamiento de agua.

Resumiendo todos los datos, podemos caracterizar el virus de la hepatitis A de la siguiente manera:

• el maestro natural es el hombre;
• animales de experimentación - marmozet, chimpancé;
• fuente de infección - heces;
• enfermedad - epidémica y endémica;
• la ruta de transmisión es fecal-oral;
• período de incubación - 14-40 días;
• transición a la hepatitis crónica - no se observó.

Las propiedades inmunológicas de NAV son las siguientes:

• Cepas de prototipo - Ms-l, CR-326, GVG. Todos son inmunológicamente similares o idénticos;
• Anticuerpos: IgM e IgG, se producen en respuesta a la introducción de proteínas estructurales del virus y son protectores;
• I La acción trófica de la y-globulina sérica humana - protege o atenúa la enfermedad bajo la condición de administración antes de la infección o durante el período de incubación.

Las características fisicoquímicas de NAU son las siguientes:

• La morfología es una partícula esférica sin concha con simetría cúbica, la cápside consiste en 32 capsómeros;
• El diámetro es 27-30 nm;
• La densidad en CsCl (g / cm3) es 1.38-1.46 (partículas abiertas), 1.33-1.34 (virión maduro), 1.29-1.31 (viriones inmaduros, partículas vacías);
• El coeficiente de sedimentación es 156-160 viriones maduros;
• Ácido nucleico - ARN lineal monocatenario;
• Peso molecular relativo - 2,25 106-2,8 106KD;
• El número de nucleótidos es 6.500-8.100.

La estabilidad del NAV en los efectos fisicoquímicos es la siguiente:

• Cloroformo, éter - es estable;
• Cloro, 0.5-1.5 mg / l, 5 ° C, 15 min - inactivación parcial;
• Cloramina, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - completa inactivación;
• Formalina, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 horas - inactivación completa, 1: 350, 20 ° С, 60 min - inactivación parcial.

Temperatura:

• 20-70 ° C - estable;
• 56 ° С, 30 minutos - es estable;
• 60 ° С, 12 horas - inactivación parcial;
• 85 ° С, 1 min - inactivación completa;
• Autoclave, 120 ° C. 20 minutos - completar la inactivación;
• Calor seco, 180 ° C, 1 h - completa inactivación;
• UV, 1.1 W, 1 min - completa inactivación.

Los datos presentados muestran que las propiedades fisicoquímicas del virus de la hepatitis A son las más cercanas a los enterovirus. Al igual que otros enterovirus, el VHA es resistente a muchas soluciones desinfectantes, completamente inactivado durante varios minutos a 85 ° C y esterilizado en autoclave.

Está demostrado que el virus de la hepatitis A puede reproducirse en líneas de cultivo monocapas primarias y de trasplante de células humanas y de mono. Reproducción Particularmente activo de la hepatitis se observó un virus en cultivos in vitro cuando se utiliza como material de partida extrae pacientes hepáticos monos. Sin embargo, cabe señalar que en todos los experimentos de acuerdo con una reproducción de virus de hepatitis A en cultivos in vitro de destacar largo período de incubación en pasajes primarios (-10 a 4 semanas), posteriormente acumulación de virales material aumenta genéticos, pero los valores absolutos son muy insignificante, lo que da razón a muchos investigadores para hablar sobre la replicación incompleta del virus de la hepatitis A en cultivos de tejidos.

Resumiendo los datos de la literatura sobre la reproducción del virus de la hepatitis A en cultivos no cuneiformes, se puede decir que el hecho de una experiencia prolongada de VHA in vitro está fuera de toda duda. Las condiciones óptimas para un alto nivel estable de replicación viral no se han identificado finalmente, y esto restringe el estudio de sus propiedades biológicas, la producción de una fuente de reactivos para la producción de agentes de diagnóstico y el diseño de vacunas.

Al mismo tiempo, se pueden encontrar juicios más optimistas sobre este problema en la literatura. La solución de todos los problemas relacionados con el cultivo del virus de la hepatitis A es una cuestión para el futuro cercano. Al estudiar las condiciones óptimas HAV propagación en cultivo de células de monos rhesus riñón embrionario reveladas dos fases: la fase de producción de virus infeccioso (hasta 6-8 días en el quinto paso) y la fase de acumulación intensiva de antígeno viral. También se muestra que la acumulación más significativa del antígeno vírico se produce bajo las condiciones del llamado cultivo en rodillo (botellas giratorias). De esta forma se abren amplias posibilidades para obtener un antígeno cultural en grandes cantidades y, en consecuencia, aparecerá un material de partida para la preparación de sistemas de diagnóstico y la fabricación de preparaciones de vacunas.

Epidemiología de la hepatitis A

El virus de la hepatitis A tiene una alta patogenicidad para los humanos. Según la conclusión de la OMS (1987), para el inicio de la enfermedad, es suficiente con infectar solo un virión. Sin embargo, la dosis infecciosa práctica es probablemente mucho más alta. La fuente de infección es solo una persona infectada. El virus se libera en grandes cantidades con heces entre 12 y 14 días antes de la aparición de ictericia y dentro de las 3 semanas. Período ictérico. No se han identificado diferencias significativas en el aislamiento del patógeno en pacientes con ictericia, ictericia y formas asintomáticas de hepatitis A. El método de infección es fecal-oral, principalmente acuoso, y también por rutas domésticas y alimentarias. El método de infección es fecal-oral, principalmente acuoso, y también por rutas domésticas y alimentarias. La principal (primaria) ruta de transmisión del virus es el agua. También es posible una infección en el aire. La susceptibilidad de la población es universal. La mayoría de los niños menores de 14 años están enfermos. La enfermedad tiene una pronunciada estacionalidad otoño-invierno.

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Síntomas de la hepatitis A

El período de incubación varía de 15 a 50 días, que depende de la cantidad de la dosis infectante del virus, pero en promedio es de 28-30 días. Una vez en el cuerpo, hepatitis A virus se replica en los ganglios linfáticos regionales, en la sangre y luego a las células del hígado y causa la hepatitis aguda difusa que se acompaña de lesiones de los hepatocitos del hígado y las células reticuloendoteliales y una disminución de sus funciones de desintoxicación y de barrera. El daño a los hepatocitos no ocurre debido a la acción directa del virus, sino como resultado de mecanismos inmunopatológicos. La imagen más típica de la hepatitis A es forma aguda ictérica cíclico: el período de incubación, la prodrómica (preictérica), ictericia y el período de convalecencia. Sin embargo, en los focos de infección revela un gran número de pacientes con formas asintomáticas y anictéricos de infección, el número de los cuales predomina sobre ictérica ( "fenómeno de iceberg").

La inmunidad postinfecciosa es fuerte y duradera, causada por anticuerpos neutralizantes virales y células de la memoria inmune.

Diagnóstico microbiológico de la hepatitis A

El diagnóstico de la hepatitis A (excepto animales de infección - los chimpancés marmozet, babuinos, que hemos) basados en varios métodos inmunológicos: método de inmunofluorescencia DGC, adherencia inmune hemaglutinación (complejo de antígeno viral + anticuerpo en presencia de complemento adsorbido en eritrocitos y provoca su adhesión) . Sin embargo, la aplicabilidad de estos métodos es limitada debido a la falta de antígenos virales específicos y reacción de inmunofluorescencia requiere biopsias de hígado, que es indeseable. Método fiable y específica es la microscopía electrónica inmune, pero es muy consumidora de tiempo. Por lo tanto, hasta que el único método aceptable para la reacción inmunológica es ensayo inmunoenzimático en fase sólida en forma de IPM, o RIM, especialmente en la modificación de la "captura" de inmunoglobulina M. En nuestro país para este sistema de prueba propósito propuesto - "DIAG-A-GEO". El principio de funcionamiento del sistema de prueba de la siguiente manera. En las paredes de poliestireno lunochek sorbidos primeros anticuerpos a las inmunoglobulinas de la clase M (M antiimmunoglobuliny) a continuación, se añade a la suero del paciente investigado. Si hay clase de anticuerpos IgM, se unen a un anticuerpo-Ti-M, después se añadieron a un antígeno particular viral (virus de hepatitis A), que se obtiene mediante el crecimiento en cultivo celular. El sistema se enjuaga, ya esto se añadieron anticuerpos antivirales marcados con peroxidasa de rábano picante. Si no ha habido interacción de todos los cuatro componentes del sistema, hay una de cuatro capas "sandwich":

• antiinmunoglobulinas M,
• inmunoglobulinas M (contra el virus de la hepatitis A - en el suero de prueba del paciente),
• antígeno viral,
• anticuerpos antivirales marcados con una enzima.

Para detectar este complejo, se agrega un sustrato para la enzima a las lunetos. Bajo la influencia de la enzima, se destruye y se forma un producto de color. La intensidad del color se puede medir cuantitativamente con un espectrofotómetro o fotocolorímetro.

La ventaja del método de "captura" de IgM es que los anticuerpos de esta clase de inmunoglobulinas aparecen en la respuesta inmune primaria e indican una etapa activa de la infección, desaparecen después de la enfermedad transferida . Los anticuerpos antivirales pertenecientes a la clase de IgG, por el contrario, persisten durante un largo tiempo después de la enfermedad, proporcionando la inmunidad adquirida. Para la detección del virus de la hepatitis A, se ha propuesto un método de sonda de ADN: se usa un ARNv complementario como sonda de ADN.

Tratamiento de la hepatitis A

Debido al hecho de que la producción de interferón se ve alterada en la hepatitis viral, el tratamiento de la hepatitis A se basa en el uso de interferón e inductor de su síntesis endógena de amixina.

Prevención específica de la hepatitis A

Hepatitis seroprevention Anteriormente ampliamente aplicado A usando gammaglobulina no se justificaba, sin embargo, el énfasis se puso en la inmunización holding, llevado a la vacunación contra la hepatitis A. Con este fin, se están desarrollando varias variantes de vacunas que ya se están utilizando. En Rusia, se obtuvo una vacuna eficaz contra la hepatitis A en 1995, y ahora se ha aplicado con éxito.