Virus de la hepatitis A

La hepatitis viral A es una enfermedad infecciosa humana, caracterizada principalmente por daño hepático y manifestada clínicamente por intoxicación e ictericia. El virus de la hepatitis A fue descubierto en 1973 por S. Feinstone (et al.) mediante microscopía electrónica inmunitaria, infectando monos (chimpancés y titíes). La esencia de este método reside en la adición de anticuerpos específicos (suero de convalecencia) al filtrado de heces de un paciente con hepatitis A y el sedimento se somete a microscopía electrónica. Debido a la interacción de los virus con anticuerpos específicos, experimentan una agregación específica. En este caso, son más fáciles de detectar, y la agregación bajo la influencia de los anticuerpos confirma la especificidad del patógeno. El descubrimiento de S. Feinstone se confirmó en experimentos con voluntarios.

El virus de la hepatitis A es esférico, el diámetro del virión es de 27 nm. El genoma está representado por ARN positivo monocatenario con mm 2.6 MD. No hay supercápside. El tipo de simetría es cúbico-icosaédrica. La cápside tiene 32 capsómeros, está formada por cuatro polipéptidos (VP1-VP4). De acuerdo con sus propiedades, el virus de la hepatitis A pertenece al género Heparnovirus, la familia Picornaviridae. En términos de antígenos, el virus de la hepatitis A (VHA - virus de la hepatitis A) es homogéneo. El VHA se reproduce bien en el cuerpo de chimpancés, babuinos, babuinos hamadryas y monos tití. Durante mucho tiempo, el virus no pudo cultivarse. Solo en la década de 1980 fue posible obtener cultivos celulares en los que el VHA se reproduce. Inicialmente, se utilizaron líneas celulares continuas de riñón de embrión de macaco rhesus (cultivo FRhK-4) para estos fines, y ahora se utiliza una línea celular continua de células de riñón de mono verde (cultivo 4647).

De acuerdo con las recomendaciones de los expertos de la OMS, se ha adoptado la siguiente nomenclatura de marcadores del virus de la hepatitis A: virus de la hepatitis A - VHA; anticuerpos contra el virus de la hepatitis A: IgM anti-VHA y IgG anti-VHA.

El VHA es una partícula pequeña con un diámetro de 27-30 nm, con simetría icosaédrica y homogeneidad. El electrograma obtenido mediante inmunoagregación revela partículas electrodensas con capsómeros superficialmente dispuestos simétricamente. Con contraste negativo, se observan en las preparaciones partículas llenas y vacías. La nucleocápside del VHA, a diferencia de la del virus de la gripe, no presenta protuberancias superficiales ni membrana. Es importante destacar que el virión del VHA no presenta una estructura acorazonada.

El virus de la hepatitis A, por sus propiedades fisicoquímicas, pertenece a la familia de los picornavirus, género enterovirus con número de serie 72. Sin embargo, esta taxonomía resultó ser demasiado inusual y la OMS consideró posible mantener la terminología “virus de la hepatitis A”.

Como todos los virus de la familia Picornaviridae, el virus de la hepatitis A contiene ácido ribonucleico. Algunos laboratorios han demostrado la posibilidad de clonar el genoma del virus de la hepatitis A, lo que abre la posibilidad de obtener vacunas.

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Resistencia al virus de la hepatitis A

El virus es relativamente resistente a altas temperaturas, ácidos, disolventes grasos (sin lípidos) y desinfectantes, y tolera bien las bajas temperaturas. Todo esto contribuye a su larga conservación en el ambiente externo. A temperatura ambiente, sobrevive varias semanas; a 60 °C, pierde parcialmente su infectividad tras 4-12 horas, y por completo tras varios minutos a 85 °C. Es muy resistente al cloro, por lo que puede penetrar en el agua corriente a través de las barreras de las plantas de tratamiento de agua.

Resumiendo todos los datos, podemos caracterizar el virus de la hepatitis A de la siguiente manera:

• El huésped natural es el hombre;
• animales de experimentación - titíes, chimpancés;
• La fuente de infección son las heces;
• La enfermedad es epidémica y endémica;
• vía de transmisión: feco-oral;
• período de incubación – 14-40 días;
• Transición a hepatitis crónica: no observada.

Las propiedades inmunológicas del VHA son las siguientes:

• Cepas prototípicas: Ms-1, CR-326, GВG. Todas son inmunológicamente similares o idénticas.
• Los anticuerpos - IgM e IgG, se producen en respuesta a la introducción de proteínas estructurales del virus y son protectores;
• I. El efecto protector de la gammaglobulina sérica humana: previene o atenúa la enfermedad si se administra antes de la infección o durante el período de incubación.

Las características fisicoquímicas del NAU son las siguientes:

• Morfología: partícula esférica sin concha con simetría cúbica, la cápside consta de 32 capsómeros;
• Diámetro - 27-30 nm;
• Densidad en CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (partículas abiertas), 1,33-1,34 (virión maduro), 1,29-1,31 (viriones inmaduros, partículas vacías);
• Coeficiente de sedimentación: 156-160 viriones maduros;
• El ácido nucleico es un ARN lineal monocatenario;
• Peso molecular relativo - 2,25 106-2,8 106KD;
• El número de nucleótidos es de 6.500 a 8.100.

La estabilidad del HAV bajo influencias físicas y químicas es la siguiente:

• Cloroformo, éter - estable;
• Cloro, 0,5-1,5 mg/l, 5 °C, 15 min - inactivación parcial;
• Cloramina, 1 g/l, 20 °C, 15 min - inactivación completa;
• Formalina, 1:4000, 35-37 °C, 72 h - inactivación completa, 1:350, 20 °C, 60 min - inactivación parcial.

Temperatura:

• 20-70 °C - estable;
• 56 °C, 30 min - estable;
• 60 °C, 12 h - inactivación parcial;
• 85 °C, 1 min - inactivación completa;
• Autoclave, 120 °C. 20 min - inactivación completa;
• Calor seco, 180 °C, 1 hora - inactivación completa;
• OVNI, 1,1 W, 1 min - inactivación completa.

Los datos presentados muestran que, en cuanto a sus propiedades fisicoquímicas, el virus de la hepatitis A es el más cercano a los enterovirus. Al igual que otros enterovirus, el VHA es resistente a diversas soluciones desinfectantes y se inactiva completamente en pocos minutos a 85 °C y en autoclave.

Se ha demostrado que el virus de la hepatitis A puede reproducirse en líneas monocapa primarias y continuas de cultivos celulares humanos y de mono. Se observa una reproducción particularmente activa del virus de la hepatitis A en cultivos in vitro al utilizar extractos de hígado de monos enfermos como material de partida. Sin embargo, cabe destacar que en todos los experimentos sobre la reproducción del virus de la hepatitis A en cultivos in vitro, se destaca el largo periodo de incubación durante los pases primarios (hasta 4-10 semanas). Posteriormente, la acumulación de material genético viral aumenta, pero los valores absolutos permanecen muy insignificantes, lo que justifica que muchos investigadores hablen de una replicación incompleta del virus de la hepatitis A en cultivos de tejidos.

Resumiendo los datos de la literatura sobre la reproducción del virus de la hepatitis A en cultivos extratisulares, se puede afirmar que la supervivencia a largo plazo del VHA in vitro es indudable. No se han identificado definitivamente las condiciones óptimas para un alto nivel de replicación viral estable, lo que dificulta el estudio de sus propiedades biológicas y la obtención de reactivos para la producción de diagnósticos y el diseño de vacunas.

Al mismo tiempo, se pueden encontrar opiniones más optimistas sobre este problema en la literatura. La solución de todos los problemas relacionados con el cultivo del virus de la hepatitis A es una cuestión de futuro próximo. Al estudiar las condiciones óptimas para la reproducción del VHA en el cultivo de células renales embrionarias de macaco rhesus, se identificaron dos fases: la fase de producción del virus infeccioso (hasta 6-8 días en el quinto pase) y la fase de acumulación intensiva del antígeno viral. También se demostró que la acumulación más significativa del antígeno viral se produce en las condiciones del llamado cultivo en rodillos (matraces rotatorios). Este método abre amplias oportunidades para la obtención de antígeno cultivado en grandes cantidades y, en consecuencia, la obtención de material de partida para la preparación de sistemas de diagnóstico y la fabricación de vacunas.

Epidemiología de la hepatitis A

El virus de la hepatitis A es altamente patógeno para los humanos. Según la OMS (1987), la infección con un solo virión es suficiente para causar la enfermedad. Sin embargo, la dosis infecciosa práctica es probablemente mucho mayor. La única fuente de infección es una persona infectada. El virus se excreta en grandes cantidades con las heces 12-14 días antes del inicio de la ictericia y durante las 3 semanas del período ictérico. No se han encontrado diferencias significativas en la excreción del patógeno en pacientes con formas ictéricas, anictéricas y asintomáticas de hepatitis A. La vía de infección es fecal-oral, principalmente transmitida por el agua, así como por el hogar y los alimentos. La principal vía de transmisión del virus es el agua. También es posible la infección por gotitas en el aire. La susceptibilidad de la población es universal. Afecta principalmente a niños menores de 14 años. La enfermedad tiene una marcada estacionalidad otoño-invierno.

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Síntomas de la hepatitis A

El período de incubación varía de 15 a 50 días, dependiendo de la dosis infecciosa del virus, pero en promedio es de 28 a 30 días. Una vez en el cuerpo, el virus de la hepatitis A se multiplica en los ganglios linfáticos regionales, penetra en la sangre y luego en las células hepáticas, causando una hepatitis difusa aguda, que se acompaña de daño a los hepatocitos y elementos reticuloendoteliales del hígado y una disminución en sus funciones de desintoxicación y barrera. El daño a los hepatocitos se produce no debido a la acción directa del virus, sino como resultado de mecanismos inmunopatológicos. El cuadro más típico de la hepatitis A es una forma cíclica ictérica aguda: período de incubación, prodrómico (preictérico), período ictérico y convalecencia. Sin embargo, en los focos de infección, se detecta un gran número de pacientes con formas de infección anictéricas y asintomáticas, cuyo número predomina significativamente sobre los ictéricos ("fenómeno del iceberg").

La inmunidad postinfección es fuerte y duradera, causada por anticuerpos neutralizantes del virus y células de memoria inmunitaria.

Diagnóstico microbiológico de la hepatitis A

El diagnóstico de la hepatitis A (excepto en animales como chimpancés, titíes y babuinos, que no disponemos de ellos) se basa en diversos métodos inmunológicos: RSC, inmunofluorescencia y hemaglutinación de inmunoadhesión (el complejo antígeno viral + anticuerpo, en presencia del complemento, se adsorbe en los eritrocitos y provoca su adhesión). Sin embargo, las posibilidades de utilizar estos métodos son limitadas debido a la falta de antígenos virales específicos, y la inmunofluorescencia requiere una biopsia hepática, lo cual no es recomendable. El método de inmunomicroscopía electrónica es fiable y específico, pero requiere mucha mano de obra. Por lo tanto, hasta el momento, la única reacción inmunológica aceptable es el análisis inmunoabsorbente de la fase sólida en forma de IFM o RIM, especialmente en la modificación de la "captura" de inmunoglobulinas de clase M. En nuestro país, se ha propuesto un sistema de prueba para este fin: "DIAGN-A-HEP". El principio de funcionamiento de este sistema de prueba es el siguiente. Primero, los anticuerpos contra las inmunoglobulinas de clase M (antiinmunoglobulinas M) se absorben en las paredes de pocillos de poliestireno. A continuación, se añade el suero del paciente a analizar. Si contiene anticuerpos IgM, estos se unirán a los anticuerpos de clase M. A continuación, se añade un antígeno viral específico (virus de la hepatitis A), obtenido mediante cultivo celular. El sistema se lava y se le añaden anticuerpos antivirales marcados con peroxidasa de rábano picante. Si los cuatro componentes del sistema interactúan, se forma un "sándwich" de cuatro capas:

• antiinmunoglobulinas M,
• inmunoglobulinas M (contra el virus de la hepatitis A - en el suero del paciente en estudio),
• antígeno viral,
• anticuerpos antivirales marcados con enzimas.

Para detectar este complejo, se añade a los pocillos un sustrato para la enzima. Bajo la influencia de la enzima, esta se destruye y se forma un producto coloreado. La intensidad del color se puede medir cuantitativamente con un espectrofotómetro o un fotocolorímetro.

La ventaja del método de captura de IgM reside en que los anticuerpos de esta clase de inmunoglobulinas aparecen durante la respuesta inmunitaria primaria e indican la fase activa de la infección; desaparecen tras la enfermedad. Por el contrario, los anticuerpos antivirales de la clase IgG persisten durante un largo periodo tras la enfermedad, proporcionando inmunidad adquirida. Se ha propuesto un método de sonda de ADN para detectar el virus de la hepatitis A: se utiliza ADN ARNv complementario como sonda.

Tratamiento de la hepatitis A

Debido a que la producción de interferón se interrumpe en la hepatitis viral, el tratamiento de la hepatitis A se basa en el uso de interferón y del inductor de su síntesis endógena, la amixina.

Prevención específica de la hepatitis A

La seroprofilaxis de la hepatitis A con gammaglobulina, ampliamente utilizada hasta ahora, no se justificó, por lo que se hizo hincapié en la profilaxis vacunal, es decir, la vacunación contra la hepatitis A. Para ello, se están desarrollando y utilizando diversos tipos de vacunas. En Rusia, en 1995 se obtuvo una vacuna eficaz contra la hepatitis A, que actualmente se utiliza con éxito.