Inmunofenotipado de hemoblastosis

Avances significativos en estudios hematológicos asociados en los últimos años con el uso de métodos inmunológicos modernos y herramientas automatizadas para analizar y las células de sangre periférica y de médula ósea de clasificación - citómetros de flujo. Morfológica tradicional y el estudio citoquímico de la enfermedad de células sustrato (sangre, médula ósea roja, los ganglios linfáticos, el bazo, etc.), en muchos casos, especialmente en enfermedades linfoproliferativas, no revelan toda la variedad de opciones entre las formas morfológicamente similares e identificar el origen del clon patológica . Estos problemas solo pueden resolverse estudiando las características inmunológicas de las células. Cada etapa de la diferenciación de las células hematopoyéticas tiene su propio conjunto de antígenos que se encuentran en la clasificación internacional conocido como la diferenciación y la diferenciación se dividen en grupos, CD designado.

En la diferenciación de bloques de cambios neoplásicos puede ocurrir en cualquier etapa de desarrollo celular normal, dando como resultado un clon celular patológica que define la enfermedad sustrato y que tiene la característica misma inmunológica (o fenotípica). Después de un estudio de estos marcadores en las células se puede determinar mediante cualquier forma o realización de la enfermedad son coherentes, es decir, sobre la base de diagnóstico diferencial fenotipo de célula inmunológica, que es el más difícil en los trastornos linfoproliferativos, porque las enfermedades patológicas sustrato celular principal son casi el mismo tipo de células morfológicamente.

El fenotipado permite la tipificación de blastos y células sanguíneas maduras de las series mieloblástica, mono y linfocítica utilizando anticuerpos monoclonales por la presencia de antígenos de diferenciación (receptores) en la pared celular. En la sección "Evaluación del estado inmune del organismo", las características y el significado diagnóstico de los marcadores celulares se describen parcialmente; A continuación hay una breve descripción de los marcadores de células antigénicas aplicadas al diagnóstico de la hemoblastosis. En las membranas de las células sanguíneas y la médula ósea roja, se pueden identificar los siguientes antígenos (marcadores).

• CD2 es una glucoproteína transmembrana monomérica. Está presente en la superficie de todos los linfocitos T circulantes y algunos linfocitos NK. CD2 participa en el proceso de activación alternativa de los linfocitos T. La detección de CD2 usando anticuerpos monoclonales en la práctica clínica se usa para el fenotipado de leucemias de células T agudas, linfomas, afecciones inflamatorias e inmunodeficientes crónicas.
• CD3 - un complejo de proteína asociado con un receptor de células T específico de antígeno, es el marcador funcional principal de los linfocitos T. Facilita la transferencia de la señal de activación de la membrana al citoplasma de la célula. La detección de CD3 está indicada para el diagnóstico de leucemia de células T aguda, linfoma (CD3 no se expresa en tumores linfoides de células T) y enfermedades de inmunodeficiencia.
• CD4 es una glucoproteína transmembrana expresada por una subpoblación de T-helpers (inductores) que constituyen el 45% de los linfocitos de sangre periférica. En las primeras etapas del desarrollo de linfocitos en el timo, todos los linfocitos corticales expresan los antígenos CD4 y CD8. Los timocitos medulares, cuyo fenotipo es similar a las células T CD4 + maduras de sangre periférica (T-helpers), ya expresan receptores CD4 o CD8. En sangre periférica, hasta 5% de las células se etiquetan simultáneamente como CD4 y CD8. La ligera expresión de CD4 es posible en algunas células de monocitos. CD4 se expresa en la mayoría de los casos, el linfoma de células T, incluyendo la micosis fungoide, y en la leucemia de células T HTLV-asociado (HTLV - virus T-linfotrópico humano - HTLV).
• CD5 - una glicoproteína de cadena simple, presente en todos los linfocitos T maduros y en la mayoría de los timocitos, se expresa débilmente por los linfocitos B. El CD5 se detecta en las células neoplásicas de la leucemia linfocítica crónica de células B y el linfoma citopático. En otros tipos de enfermedades linfoides malignas: linfoma folicular, leucemia de células pilosas, linfoma de células grandes, no se expresa CD5.
• CD7 es una proteína monocatenaria, el marcador más temprano de diferenciación de células T. Se expresa por los linfocitos T pro incluso antes de que migren al timo. CD7 se detecta en la mayoría de las células NK, la expresión débil se observa en los monocitos. Los linfocitos B y los granulocitos no contienen este antígeno. La definición de CD7 se usa para el diagnóstico de linfomas, leucemia linfoblástica de células T en niños.
• CD8 es una proteína que consiste en dos cadenas polipeptídicas unidas por puentes disulfuro. Se expresa mediante una subpoblación de linfocitos T citotóxicos y supresores, que comprenden 20-35% de los linfocitos de sangre periférica. Este antígeno también tiene linfocitos NK, timocitos corticales, 30% de timocitos medulares y una subpoblación de células rojas de la médula ósea. CD8 se examina para la evaluación cuantitativa del contenido del supresor T (ver la sección "Supresores de linfocitos T en la sangre" más arriba).

• CD10 es la endopeptidasa asociada a la membrana celular. CD10 expresa formas jóvenes de linfocitos B y una subpoblación de linfocitos corticales. CD10 expresa todas las células de ALL.
• CD11c expresan macrófagos, monocitos, granulocitos, células NK y células de leucemia de células pilosas en la membrana celular.
• CD13 es una glicoproteína expresada por células mielomonocíticas (células progenitoras, neutrófilos, basófilos, eosinófilos, monocitos y células de leucemia mieloide). Está ausente en linfocitos T y B, eritrocitos y plaquetas.
• CD14 es una glucoproteína de membrana de superficie. Se expresa principalmente por monocitos y macrófagos. CD14 se detecta en más de 95% de monocitos de sangre periférica y médula ósea. Se observa una fuerte expresión de CD14 en la leucemia mieloblástica aguda. En la leucemia linfoblástica aguda y crónica, este antígeno no se expresa.
• CD15 es un oligosacárido. Él participa en los procesos de fagocitosis y quimiotaxis. Este antígeno está presente en la superficie de granulocitos maduros y células de Berezovsky-Sternberg. La expresión del antígeno CD15 se detecta en la enfermedad de Hodgkin. En los linfomas no Hodgkin, CD15 no se detecta en la mayoría de los casos.
• CD16 se expresa en la superficie de granulocitos, monocitos, macrófagos y células NK. Todos los linfocitos que expresan este antígeno tienen la capacidad de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. CD16 se determina cuando se tipan leucemias mielocíticas crónicas, para caracterizar las células NK.
• CD19 es una glicoproteína presente en todos los linfocitos B periféricos, así como en todos los precursores de células B. Está ausente en las células plasmáticas. Este es el primer marcador de las células B, juega un papel importante en la regulación de la activación y proliferación de los linfocitos B. CD19 se expresa en todas las células neoplásicas de la leucemia aguda de origen de células B, y también está presente en algunas formas de leucemia monoblast aguda.
• CD20 es una proteína no glicosilada. En la ontogénesis de los linfocitos B, el antígeno CD20 aparece después de CD19 en la etapa de diferenciación de linfocitos pre-B-células. Está ausente en la membrana plasmática de las células plasmáticas. Se expresa en ALL, leucemia linfocítica crónica de células B, leucemia de células peludas, linfoma de Burkitt y muy raramente en leucemia monoblast aguda.
• CD21 es una glicoproteína, en una cantidad significativa está presente en los linfocitos B en los órganos linfoides y en una pequeña cantidad en las células B de la sangre periférica. CD21 es un receptor para el virus de Epstein-Barr.
• CD22 es una proteína que consiste en dos cadenas polipeptídicas. Se expresa en la membrana de la mayoría de los linfocitos B, incluidas las células progenitoras (prolinfocitos). El antígeno no se expresa en los linfocitos B (células plasmáticas) después de su activación. La expresión más pronunciada de CD22 se detecta en las células con leucemia de células pilosas, débil: en las leucemias mieloides y en la LLA que no es de células T.
• CD23 es una glicoproteína expresada por linfocitos B activados de sangre periférica en una extensión mucho mayor. CD23 media la citotoxicidad y fagocitosis dependiente de IgE por macrófagos y eosinófilos.
• CD25 es una glicoproteína de cadena única identificada como un receptor de baja afinidad para IL-2. Este receptor se expresa en linfocitos T activados y, a una densidad menor, en células B activadas. En la sangre periférica de personas sanas, el antígeno está presente en más del 5% de las células linfoides.
• CD29 es un receptor de fibronectina. Se distribuye ampliamente en los tejidos, se expresa mediante leucocitos. La detección de CD29 en células sanguíneas periféricas se usa para tipificar una subpoblación de células T que tienen el fenotipo CD4 + CD29 +, que se denominan ayudante Tipo 2 (Th2). Estas células, a través de la producción de linfocinas, participan en la realización de la respuesta inmune humoral.
• CD33 es una glicoproteína transmembrana. Está presente en la superficie de las células de la serie mieloide y monocítica. Se encuentra en la superficie de monocitos y, en menor medida, granulocitos de sangre periférica. Aproximadamente el 30% de las células rojas de la médula ósea expresan CD33, incluidos mieloblastos, promielocitos y mielocitos. El antígeno está ausente en las membranas de las células madre pluripotentes. CD33 se usa para caracterizar células en leucemias mieloides. Las células de leucemia de origen linfoide y eritroide no expresan CD33.
• CD34 es una fosfoglicoproteína, expresada por células progenitoras hematopoyéticas, incluidas las células madre monopotentes. La expresión más pronunciada de Ar se observa en los primeros progenitores; cuando las células maduran, la expresión del marcador cae. CD34 también se encuentra en células endoteliales. CD34 se utiliza para caracterizar células en leucemia mielógena y linfoblástica aguda. Con la leucemia linfocítica crónica y los linfomas, no se detecta la expresión del antígeno CD34.

• CD41a se expresa mediante plaquetas y megacariocitos. Los anticuerpos monoclonales para la detección de CD41a se usan para diagnosticar la leucemia megacarioblástica. Con Glązmann thrombasthenia, la expresión de este antígeno está ausente o significativamente suprimida.
• CD42b es una glicoproteína de membrana que consiste en dos cadenas polipeptídicas. El marcador se encuentra en la superficie de plaquetas y megacariocitos. En la práctica clínica, la detección de CD42b se usa para diagnosticar la trombocitopatía, síndrome de Bernard-Soulier.
• CD45RA pertenece a la clase de glicoproteínas transmembrana. Este es un antígeno leucocitario común. Se expresa en la membrana celular de los linfocitos B, en menor medida en los linfocitos T y en los timocitos medulares maduros. El marcador no es expresado por granulocitos.
• CD45RO es una isoforma de bajo peso molecular de CD45RA - un leucocito común Ag. Se encuentran en células T (linfocitos T de memoria), subpoblaciones de linfocitos B, monocitos y macrófagos. Los anticuerpos monoclonales para CD45RO interactúan con la mayoría de los timocitos, una subpoblación de linfocitos T CD4 + y CD8 + en reposo y células T activadas maduras. Las células de origen mielomonocítico, granulocitos y monocitos también portan este antígeno. Se detecta en linfomas centroblásticos e inmunoblásticos.
• CD46 - Dímero O-glicosilado. Se distribuye ampliamente en los tejidos y se expresó T y linfocitos B, monocitos, granulocitos, células NK, plaquetas, células endoteliales, fibroblastos, pero está ausente en la superficie de los eritrocitos. CD46 proporciona protección tisular a partir de la acción del complemento.
• CD61 es un antígeno plaquetario. Se expresa en plaquetas de sangre periférica y médula ósea roja, así como en megacariocitos y megacaryoblasts. Su definición se usa como un marcador para la leucemia megacarioblástica aguda. La expresión del antígeno está ausente o suprimida en pacientes con trombastenia de Glanzmann.
• CD95, también llamado Fas o APO-1, es una glicoproteína transmembrana, un miembro de la familia de receptores del factor de necrosis tumoral. Se expresa en cantidades significativas en linfocitos T de sangre periférica (CD4 + y CD8 +) y, en menor medida, en linfocitos B y células NK. Este antígeno también se expresa en granulocitos, monocitos, células de tejidos y células neoplásicas. La unión de CD95 al ligando Fas (CD95L) induce la apoptosis en las células.
• CD95L, o ligando de Fas, una proteína de membrana que pertenece a la familia de receptores del factor de necrosis tumoral. Este antígeno se expresa por linfocitos T citotóxicos, células NK y muy a menudo por células tumorales; el principal inductor de la apoptosis en las células.
• HLA-DR es un determinante monomórfico de las moléculas de clase II del complejo principal de histocompatibilidad humana (HLA). El marcador se expresa en células de Langerhans, células dendríticas de órganos linfoides, ciertos tipos de macrófagos, linfocitos B, células T activadas y células epiteliales del timo. La prueba para este marcador se usa para cuantificar los linfocitos T activados con el fenotipo CD3 + HLA-DR +.

Usando una selección diferente de anticuerpos monoclonales para marcadores, es posible hacer un retrato fenotípico de células características de una determinada forma de leucemia.

Además de utilizar técnicas de inmunofenotipaje para el diagnóstico y el diagnóstico diferencial de enfermedades malignas hematológicas, particularmente importante volvieron su uso en el proceso de tratamiento para evaluar el estado de la remisión y de la población residual de células leucémicas. Conociendo la fenotípica "retrato" de blastos en el período de diagnóstico, a estos marcadores se pueden encontrar células clon leucémico en remisión, y desde el aumento de su número - para predecir el desarrollo de la recaída de largo (de 1-4 meses) hasta que sus rasgos morfológicos y clínicos.

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